TESTE DO TETRAZÓLIO EM SEMENTES
1. Introdução
O teste de
tetrazólio baseia-se na atividade das enzimas desidrogenases (AOSA, 1983;
Bulat, 1961; Copeland et al, 1959; Moore, 1973; Smith, 1952; Smith e
Throneberry, 1951) as quais catalizam as reações respiratórias nas mitocôndrias,
durante a glicólise e o ciclo de Krebs. Estas enzimas, particularmente a
desidrogenase do ácido málico, reduzem o sal de tetrazólio (2,3,5-trifenil
cloreto de tetrazólio ou TCT) nos tecidos vivos. Quando a semente é imersa na
solução incolor de TCT, esta é difundida através dos tecidos, ocorrendo nas
células vivas a reação de redução que resulta na formação de um composto
vermelho, estável e não-difusível, conhecido por trifenilformazan.
2. Objetivo
Determinar a ocorrência e a
localização da atividade de desidrogenases de sementes.
3. Material
Grão de milho embebidos por 12 a 24 horas;
Solução de TTC a 1% (Cloreto de
Tetrazólio);
Banho-maria fervente;
Tubos de penicilina;
Lamina de barbear;
Pinça;
Lamparina;
Placa de petri.
4. Métodos
Colocou-se os grãos de milho pra
ferver com o auxilio de uma lamparina por 10 (dez) minutos;
Depois de fervido, partiu-os ao meio
(os grãos), e colocou-os numa placa de petri;
Em outra placa foram colocados grãos
de milho somente, embebidos em água pelo tempo recomendado, e cortados ao meio.
5. Resultados
Não
foi possível observar os resultados, pois o TCC estava vencido.
6. Conclusão
Não foi possível obter uma
conclusão, mas é sabido que quando o TCT é reduzido, formando o
trifenilformazan, isto indica que há atividade respiratória nas mitocôndrias,
significando que há viabilidade celular e do tecido. Portanto, a coloração
resultante da reação é uma indicação positiva da viabilidade através da
detecção da respiração a nível celular. Tecidos não viáveis não reagem e consequentemente
não são coloridos.
Sendo o tecido vigoroso, haverá a formação de
um vermelho carmim claro; se o tecido está em deterioração, um vermelho mais
intenso será formado, em virtude da maior intensidade de difusão da solução de
TCT pelas membranas celulares comprometidas de tais tecidos; se o mesmo é não
viável, a redução do sal não ocorrerá, e o tecido morto contrastará como branco
(não colorido) com o tecido colorido viável. A observação de tais diferenças de
cor, juntamente com o conhecimento de diversas características das sementes,
permite a determinação da presença, da localização e da natureza dos distúrbios
que podem ocorrer nos tecidos embrionários (Moore, 1973).
LACERDA,
G.A. Manual de Aulas Práticas em
Biologia Celular. Janaúba: UNIMONTES, Faculdade de Zootecnia, 2013.
FRANÇA
NETO, J.B.; KRZYZANOWSKI, F.C.; COSTA, N.P. da. O teste de tetrazólio em
sementes de soja. Londrina : EMBRAPA-CNPSo, 1998. 72p. (EMBRAPA-CNPSo. Documentos,
116).
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