AULA PRATICA N° 4
1. Introdução
Os métodos de fracionamento celular consistem na separação e isolamento de diversos componentes celulares, para seu posterior estudo através de técnicas bioquímicas ou de biologia molecular. Eles se baseiam essencialmente na homogeneização dos tecidos e na destruição dos limites celulares por meio de diferentes procedimentos mecânicos ou químicos, com posterior separação das frações subcelulares, de acordo com sua massa, superfície e peso específico (DE ROBERTIS, 2003).
Um dos métodos mais utilizados é o de fracionamento celular por centrifugação diferencial, que consiste na separação gradativa das organelas de células, de acordo com sua densidade, que são submetidas a rotações que fazem com que a força centrífuga exercida sobre as células, rompa as membranas celulares e agrupem as organelas de acordo com sua densidade. Esta técnica consiste em uma série de centrifugações com velocidades gradativamente maiores; as organelas ou inclusões mais densas precipitam primeiro (precipitado chamado de pilet), e o sobrenadante é retirado e centrifugado novamente.
2. Objetivo
Separar os componentes celulares através do fracionamento por centrifugação para o estudo da organização molecular e do funcionamento da célula.
3. Material
· 01 Almofariz e 01 pistilo
· 01 Tubo de microcentrifuga
· Pipetas de Pasteur
· Centrífuga
· Detergente de Louça
· Folhas variegadas
· Vinagre
· Detergente
3.1. Soluções
· Água destilada
4. Procedimento
· Para realização desta experiência precisou-se de 25 ml de água acidulada, obtida da seguinte forma, em 25 ml de água destilada com o auxilio da pipeta de Pasteur colocou-se três gotas de vinagre.
· Logo após este procedimento colocou-se as folhas variegadas Tradescantia dentro do almofariz e a água já acidulada aos poucos, e iniciou-se o processo de maceração.
· Quando a água começa a ficar com um tom amarronzado para o processo de maceração.
· Logo após, transferiu a parte líquida com uma pipeta de Pasteur para um tudo de microcentrifuga.
· Colocou-se o tubo na microcentrifuga, após 15 segundos de centrifugação, retirou-se fibras e outros residos.
· Logo após transferiu o sobrenadante para um novo tubo, e colocando-o novamente na microcentrifuga, centrifugando assim por 5 minutos.
· Podemos ver após retirar o tubo da microcentrifuga que o sobrenadante tem cor roxa pela presença da antocianina, e no fundo do tudo precipitado verde pela presença dos cloroplastos.
· Retirou-se o sobrenadante do tubo, adicionou-se ao precipitado água acidulada.
· Logo após acrescentou uma gota de detergente no tubo contendo solução verde e agitou-o por cerca de um minuto. Pôde-se perceber que o detergente reage, destruindo os cloroplastos.
5. Resultado
Pode-se perceber o líquido de cor roxa a antocianina e no fundo do tubo um precipitado de cor verde mais escuro os cloroplastos.
Foto : Emannuelle Alves - Figura 01
A água acidulada adicionada ao precipitado verde.
Foto : Emannuelle Alves - Figura 02
Pode-se perceber que o detergente reage, destruindo os cloroplastos.
Foto : Emannuelle Alves - Figura 03
Cloroplastos aumentando 1000 vezes maior do que o seu tamanho real.
Foto : Emannuelle Alves - Figura 04
6. Conclusão
O experimento foi dividido basicamente em 4 (quatro) etapas: maceração da Tradescantia com água acidulada, centrifugação da parte líquida obtida após a maceração, centrifugação do sobrenadante da etapa anterior e a centrifugação do sobrenadante com o detergente.
A obtenção de organelas através do processo de fracionamento celular é diretamente proporcional ao tempo. Esses fatores estão relacionados com o conhecimento da massa, viscosidade, superfície e peso específico das organelas que serão estudadas.
7. Referências
DE ROBERTIS, E. D. P. Biologia Celular e Molecular. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan S. A. 2003
MAIA, T. Aula prática 4 - relatório 3 - Fracionamento celular, disponível em: < http://www.ebah.com.br/content/ABAAABIaYAB/aula-pratica-4-relatorio-3-fracionamento-celular#comments>
Vídeo feito em laboratório <disponível em> http://www.youtube.com/watch?v=Jq_qrxp4H-M
http://www.youtube.com/watch?v=uCq4OtWb-RY
LACERDA, G. A. Manual de Aulas Práticas em Biologia Celular. Janaúba: UNIMONTES, Faculdade de Zootecnia, 2013.
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